无菌隔离器是如何来灭菌的，我们一起来看看！

　　无菌隔离器灭菌方法

　　1、菌悬液的制备

　　①取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液15ml；菌悬液平均分装于3小蓝盖瓶内，瓶口密封(包装形式与无菌检查供试品一致)，2～8℃冰箱存放，24h内备用。

　　②取白色念珠菌的新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制备成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液15ml。菌悬液同金黄色葡萄球菌菌悬液同法分装及保存。

　　③取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后取孢子悬液至无菌试管，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的孢子悬液15ml。菌悬液同金黄色葡萄球菌菌悬液同法分装，2～8℃冰箱存放，2月内备用。

　　2、无菌隔离器的准备

　　以无菌隔离器装载量的要求将无菌检查所需物品摆放到无菌隔离器内部相对应的位置；无菌隔离手套及舱体密封性测试合格；运行参数已确认。

　　3、过氧化氢气体浓度及分布状态确认

　　取19支过氧化氢蒸汽化学指示剂编号，放入无菌隔离器的手套部位、进出风口、风扇背部、舱体上下四角及垃圾桶底部，灭菌完成后观察变se情况。

　　4、BI挑战实验

　　取13支过氧化氢灭菌生物指示剂(嗜热脂肪芽孢菌片)分布于无菌隔离器的8个手套部位、左右舱门、舱体操作台面的左右及垃圾桶底部，灭菌完成后菌片取出接种于胰酪大豆胨液体培养基中，56℃培养，培养7天，观察培养物的生长情况，同时取未经灭菌的生物指示剂3片同法接种，作为阳性对照。

　　5、无菌隔离器开启灭菌

　　开启无菌隔离器的自动运行程序，依次按照“自动除湿”、“自动调节”、“自动灭菌”、“自动通风”、“自动保压”五个阶段完成运行程序。

　　6、沉降菌检测

　　取胰酪大豆胨琼脂平皿培养基15个，摆放在隔离器舱体操作台面上，台面两侧各放置6个平皿，台面左右两侧各放置1个平皿，垃圾桶底部放置1个平皿。平皿暴露采样4小时，同时取3只培养基作空白对照，采集完的培养基及空白对照培养基置于20～25℃培养箱中培养72小时后，再转入30～35℃培养箱中培养48小时，记录培养皿中菌落数量。

　　7、浮游菌检测

　　取样点为隔离器操作平台的左右各1个点，使用胰酪大豆胨琼脂平皿，在取样点工作区附近放置取样器，进行空气取样，各取样点的取样量为1000升，同时取3只培养基作空白对照，采集完的培养基及空白对照培养基置于20～25℃培养箱中培养72小时后，再转入30～35℃培养箱中培养48小时，记录培养皿中菌落数量。

　　8、表面微生物的检测

　　取胰酪大豆胨琼脂接触碟培养基6个分别对隔离器舱体内表面的上部、下部、左部、右部、前部、后部进行接触10秒采样；取胰酪大豆胨琼脂接品平皿培养基(TSA)分别对8个手套指模进行取样，同时取3只培养基作空白对照，采集完的培养基及空白对照培养基置于20～25℃培养箱中培养72小时后，再转入30～35℃培养箱中培养48小时，记录培养皿中菌落数量。

　　9、选择性微生物挑战试验

　　①试验组一：选择性微生物菌悬液，小瓶密闭分装后经无菌隔离器过氧化氢蒸汽灭菌，接种计数。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液各1ml接种于TSA上，平行接种两次，30～35℃培养48～72小时，菌落计数，取平均值；取白色念珠菌、黑曲霉菌悬液1ml接种至沙氏葡萄琼脂培养基上，平行接种两次，30～35℃培养3～5天，菌落计数，取平均值。

　　②试验组二：选择性微生物菌悬液，小瓶密闭分装后经无菌隔离器过氧化氢蒸汽灭菌，并在灭菌完成后拆开菌悬液瓶口，使内容物在无菌隔离器内暴露5min，然后同试验组一同法接种计数。

　　阳性对照组：取保存在冰箱内同批制造的选择性微生物菌悬液，同试验组一同法接种数。

　　阴性对照组：另取0.9%无菌氯化钠同法接种于TSA及沙氏葡萄琼脂培养基上，作为阴性对照组。无菌隔离器